■ 制品内容(Code No. 3281)
Cell Lysate＊1 100 μl
Mixture-1 60 μl
Mixture-2＊2 10 μl
Mixture-3＊2 20 μl
T7 RNA Polymerase (200 U/μl) 10 μl
pT7-IRES Vector (0.5 μg/μl) 20 μl
Control Vector＊3 (0.3 μg/μl) 5 μl
*1 现用现融解，使用微量移液器轻轻混合均匀并迅速使用，使用完毕立即置于-80℃保存。
注：虽然5次反复冻融基本不会造成产品性能下降，但建议小量分装保存。
*2 Mixture-2和Mixture-3中均含有蛋白质，其中Mixture-2中含有HN标签蛋白质，因此应避免剧烈搅拌或振荡。
*3 该质粒在pT7-IRES中插入了β-半乳糖苷酶基因。
■ 制品说明
Human Cell-Free Protein Expression System是利用人源细胞提取物的无细胞蛋白质合成系统。本系统中的Cell Lysate包含了所有体外蛋白质合成的必需因子(核糖体、翻译起始/延伸因子和tRNA等)。只需将携带靶基因的pT7-IRES Vector、T7 RNA Polymerase、Mixture-3(氨基酸和ATP等)和Mixture-2(翻译增强因子)加入到Cell Lysate中，就可以在一个反应管中完成从RNA转录到蛋白质合成的反应，操作十分简单。本制品具有反应体系小、反应速度快、可合成无细胞蛋白质的优点。 pT7-IRES Vector转录得到的目的RNA含有IRES序列，这段序列能够增强蛋白质翻译的起始。反应液中添加了翻译增强因子，在蛋白质合成过程中，它能够活化Cell Lysate中无活性的翻译起始因子，从而维持了稳定的翻译水平。本系统不仅提高了蛋白质合成的效率，弥补了哺乳类无细胞蛋白质合成系统翻译水平低的缺陷，而且能够合成超过150 kDa的高分子量蛋白质。 本系统适用于高通量的蛋白质合成反应，只需一步即可完成。由于毒性蛋白会抑制宿主细胞生长和功能，导致很难利用活细胞表达系统来合成毒性蛋白质，所以本系统尤其适用于合成毒性蛋白质。
* 3290/3291/3292与3281搭配使用，可表达带有His标签或Myc标签的蛋白质。
■ 保存
3281：-80℃；3290、3291、3292：-20℃。
■ pT7-IRES Vector 的结构