■ 制品内容 (5 μl反应体系，100次量)
|
|
Lysis Buffer (4X)
|
150 μl
|
|
Recombinant RNase Inhibitor (40 U/μl)
|
30 μl
|
|
RT dT Primer 2
|
12 μl
|
|
dNTP Mixture (2.5 mM each)
|
12 μl
|
|
MgCl2 (22.5 mM)
|
36 μl
|
|
RT Enzyme Mix 2*1
|
36 μl
|
|
Exonuclease I (5 U/μl)
|
72 μl
|
|
TdT Buffer (5X)
|
144 μl
|
|
dATP (90 mM)
|
24 μl
|
|
TdT Enzyme Mix*2
|
54 μl
|
|
PCR Primer Mix 2
|
300 μl
|
|
RNase Free dH2O
|
1 ml
|
|
*1 含有PrimeScript Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor。
*2 含有Terminal Deoxynucleotidyl Transferase、RNase H。
■ 制品说明
本制品是从少数细胞直接反转录合成cDNA，然后对反转录的cDNA进行扩增的试剂盒。扩增的cDNA可以作为Real Time PCR的模板使用。通常情况下，进行微量核酸提取时，纯化过程中核酸会有所损失，使用本制品不需要对细胞RNA和反转录的cDNA进行纯化，即可对反转录的cDNA高效扩增。
使用本试剂盒首先溶解细胞，然后使用dT Adaptor Primer（RT dT Primer 2）进行反转录反应，由mRNA合成cDNA，通过TdT酶对合成的cDNA进行dA加尾反应后，以此作为模板进行PCR反应扩增cDNA。
本制品除了能从少数细胞直接进行cDNA扩增外，也可以对微量的RNA进行cDNA扩增。
本试剂盒还添加了Exonuclease I 的处理步骤，能够抑制引物的非特异性扩增，并且提高低表达水平基因的扩增产量。
■ 保存
-20℃。
■ 注意事项
1. 为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先按反应数+1的量配制Master Mix，然后再分装到每个反应管中。因为反应体系比较小，建议每次反应至少要配置5个反应以上的Master Mix。
2. 各步反应结束后，反应管放在冰上冷却，轻微离心后再进入下一步操作。
3. 请使用0.2 ml的Microtube和PCR仪进行反应。