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pMD18-T Vector Cloning Kit
货号：6011  |  规格：20 Rxns  |  品牌：Takara
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说明
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商品详情

 
 
RNA起始合成cDNA → PCR扩增目的片段 → PCR产物纯化 → In-Fusion无缝克隆 → 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接

■ 制品内容

pMD 18-T Vector (50 ng/μl)                 20 μl × 1 支
Control Insert (50 ng/μl)                      10 μl × 1 支
Solution I*                                               75 μl × 2 支
   
* 使用时请于冰中融解。  
 
■ 制品说明
pMD 18-T Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。本载体由pUC18载体改建而成，在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I 和Sal I 识别位点之间插入了EcoR V 识别位点，用EcoR V 进行酶切反应后，再在两侧的3′端添加 “T” 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3′末端添加一个 “A” 的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
由于本载体以pUC18载体为基础构建而成，所以它具有同pUC18载体相同的功能。此外，本制品中的高效连接液Solution I 可以在短时间内 (约30分钟) 完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 纯度
Control Insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
 
■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。
2. 对克隆后的PCR产物使用BcaBEST Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。
 
■ pMD 18-T Vector的结构

 



■ 注意事项

1. Solution I 请于冰中融解。
2. 克隆时使用的Insert DNA片段 (PCR产物) 建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA (甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。
3. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094) 可以提高DNA的回收率。
4. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
5. 本制品来源于pUC18载体，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
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