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Blunting Kination Ligation (BKL) Kit
货号：6127A  |  规格：24 Rxns  |  品牌：TaKaRa
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说明
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商品详情
■ 制品内容 (24 次量)
10X Blunting Kination Buffer                                                      50 μl
Blunting Kination Enzyme Mix                                       25 μl
Ligation Solution I*1                                                                    150 μl
Control Vector (pUC118-Hinc II /BAP; 50 ng/μl)                  5 μl
Control Insert (200 ng/μl)*2                                                     10 μl
ddH2O                                                                                             500 μl
 
*1 Ligation Solution I 即为DNA Ligation Kit Ver.2.1的一种组份。
*2 以λ DNA为模板，通过TaKaRa Taq反应扩增的500 bp的PCR片段。
 
■ 制品说明
Blunting Kination Ligation (BKL) Kit是一种能使DNA片段的末端平滑化、5’端的磷酸化、DNA片段和载体的连接等诸反应高效快速完成的试剂盒。使用本试剂盒时，DNA片段的末端平滑化反应和5’端的磷酸化反应可在一个反应体系中同时进行，反应时间只需10分钟。此外，本试剂盒中还含有高效的DNA连接液，可在短时间内完成连接反应。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Takara BKL Kit原理
 

 ■ 注意事项
1. Ligation Solution I 请于冰中融解，使用前混匀。应避免多次反复冻融。
2. 连接转化效率低时，请试用下述方法进行改进。
① 确认感受态细胞的转化效率。
② 延长连接反应时间至过夜反应。
③ 连接反应后向溶液中加入NaCl使其终浓度为500 mM，再做细菌转化。
如果以上操作仍不能改善连接效率，则需对连接后的DNA进行纯化。
3. 当使用具有lacZ基因的载体克隆短链DNA片段时，有时即使插入了DNA片段也会有不出现停止密码或者读框不改变的情况发生，在颜色选择培养基上形成淡蓝色的单菌落。
4. 短链DNA克隆时，有时会有插入内含数个串联DNA片段的克隆体出现。
5. 如果PCR反应过程中需要加入矿物油，则要注意勿将其带入后面的反应液中。
6. 带有磷酸基的3’凹陷末端的DNA片段无法使用本试剂盒进行末端平滑化反应。
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