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LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV )
货号:6962  |  规格:1 Set  |  品牌:Takara
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说明
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■ 制品内容
·LVpro Packaging Mix (Code No. 6195)
LVpro Packaging Mix,60次用量*1(140 μl × 3)
*1:当使用100-mm培养皿时。
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV Vector) (Code No. 6962)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EI Vector) (Code No. 6963)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1 α Vector) (Code No. 6964)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-ZsGreen1 Vector) (Code No. 6965)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-MSCV-EF1-ZsGreen1 Vector) (Code No. 6966)
·LVpro Packaging Mix (pLVpro-EF1 α -ZsGreen1 Vector) (Code No. 6967)
Code No. 6962-6967是由LVpro Packaging Mix (Code No. 6195) 和不同pLVpro Vector(Code No. 6956–6961)组成的套装,所包含的pLVpro Vector不单独销售。
pLVpro Vectors (Code No. 6956-6961):浓度为0.5 μg/μl, 质量为20 μg,体积为40 μl。
 
■ 制品说明
·HIV-1 tat非依赖性第三代慢病毒载体
·临床使用可能 ,将HIV-1来源序列排除到极限 ,提高安全性
·优化了包装系统,制备高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector组合使用可进行P2实验(注:取决于插入基因)
 
LVpro Packaging Mix是经过优化的质粒混合物,高效表达慢病毒制备所需要的成分,用于包装生产高滴度重组慢病毒。将pLVpro慢病毒载体和LVpro包装质粒混合物共转染Lenti-X 293T细胞,包装质粒瞬时表达Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白,这有助于将重组病毒RNA(从pLVpro慢病毒载体转录而来)包入完整的病毒粒子中(图1)。使用这种经过优化的包装质粒混合物和高效转染Lenti-X 293T细胞的转染试剂Trans IT-Virus-GEN(Mirus Bio, Code No. MIR6700)或Trans IT-293(Mirus Bio, Code No. MIR2700),可以获得高滴度的重组慢病毒,而且在多数情况下,该病毒可用于直接感染靶细胞,而不需要事先进行浓缩处理。
 
pLVpro vector是tat非依赖性第三代慢病毒载体,其中5’LTR的U3区域被CMV启动子取代,并且在不影响感染滴度的情况下删除了包装信号附近的HIV来源序列。
 

图1. 使用LVpro Packaging Mix和Lenti-X 293T cells制备慢病毒。


使用LVpro Packaging Mix和携带目标基因的pLVpro慢病毒载体共转染Lenti-X 293T cells(Step1),产生相应的重组慢病毒基因组RNA转录本和病毒包装蛋白(Step2)。重组病毒RNA基因组上的包装信号(ψ)被包装蛋白所识别(Step3),使重组病毒RNA和包装蛋白相结合,形成病毒核心并被转运到细胞膜(Step4)。在那里,病毒核心被包含VSV-G包膜蛋白的细胞膜包裹。这样成熟的具有感染性的病毒粒子从细胞中产生了(Step5),这些病毒粒子会被释放到培养液中,然后从培养液中回收病毒粒子(Step6)。

 
虽然用这种试剂盒产生的病毒粒子是具有感染性的,但它们缺少在靶细胞中复制和增殖所必需的七种基因。该试剂盒使用了多种不同的质粒用于表达病毒蛋白,因此除非多次发生低频重组,否则很难产生具有复制能力的病毒,这样试剂盒的使用是非常安全的。
 
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