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E.coli HB101 Competent Cells
货号:9051  |  规格:100 ?l x 10  |  品牌:Takara
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制品说明
在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出Competent Cells,当1 ng pBR322转化100 μl 细胞时,转化效率>1×108 cfu/μg。
E.coli HB101 Competent Cells 可用来制作DNA文库或重组质粒的亚克隆。
 
细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
Genotype
E. coli HB101:
F-, hsd S 20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1,supE44, leuB6, thi-1.
 
保存
-80℃。

注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pBR332对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。


转化效率
转入1 ng 的pBR322,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 cfu/μg pBR322
 
注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 对于转化,可以使用1.5 ml微量离心管代替14 ml圆底管(BD Code:352059或352057等),
   但转化效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。

4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yyeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth : Ingredient per liter water  
  Ttryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 稀释转化混合物时,使用“使用方法”中步骤7中添加的培养基。
7. 一旦感受态细胞解冻,不建议重新冷冻储存。 如果不可避免,应用干冰/乙醇快速冷冻细胞,
   并在-80℃下迅速保存。但是,转化效率将会降低 。

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