■ 制品说明
在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出Competent Cells,当1 ng pBR322转化100 μl 细胞时,转化效率>1×108 cfu/μg。
E.coli HB101 Competent Cells 可用来制作DNA文库或重组质粒的亚克隆。
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
■ Genotype
E. coli HB101:
F-, hsd S 20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1,supE44, leuB6, thi-1.
■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pBR332对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
■ 转化效率
转入1 ng 的pBR322,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 cfu/μg pBR322
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 对于转化,可以使用1.5 ml微量离心管代替14 ml圆底管(BD Code:352059或352057等),
但转化效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
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·L-broth :
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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10 g
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Yyeast extract
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5 g
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NaCl
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5 g
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用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
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·φ b-broth :
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Ingredient
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per liter water
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Ttryptone
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20 g
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Yeast extract
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5 g
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MgSO4·7H2O
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5 g
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用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
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6. 稀释转化混合物时,使用“使用方法”中步骤7中添加的培养基。
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7. 一旦感受态细胞解冻,不建议重新冷冻储存。 如果不可避免,应用干冰/乙醇快速冷冻细胞,
并在-80℃下迅速保存。但是,转化效率将会降低 。
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