■ 制品内容
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E.coli JM109 Competent Cells
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100 μl × 10
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pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl)
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10 μl
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SOC Medium*
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1 ml × 10
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*SOC Medium: 2%
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Tryptone
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0.5%
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Yeast extract
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10 mM
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NaCl
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2.5 mM
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KCl
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10 mM
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MgSO4
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10 mM
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MgCl2
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20 mM
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Glucose
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■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli JM109 Competent Cells。
由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 质粒，可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞，也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时，重组体可以利用感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
■ Genotype
E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15]
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pBR332 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
■ 转化效率
转入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圆底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒，而不是45秒。
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5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
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·L-broth :
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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10 g
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Yeast extract
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5 g
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NaCl
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5 g
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用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。
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·φ b-broth:
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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20 g
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Yeast extract
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5 g
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MgSO4·7H2O
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5 g
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用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。
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6. YT soft agar:
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Ingredient
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per 100 ml water
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Tryptone
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0.8 g
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Yeast extract
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0.5 g
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NaCl
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0.5 g
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用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为0.6%，并高压灭菌。
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7. 制备宿主细胞。
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8. L-plate:
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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10 g
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Yeast extract
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5 g
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NaCl
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5 g
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用1 N NaOH调整pH到7.5，加入agar至浓度为1.5%，并高压灭菌。
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9. 当加入X-Gal或IPTG时，按照以下方法操作：
·将100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中，若使用soft agar，比例为 25 μl/3 ml。
·将20 mg /ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中，若使用soft agar，比例为50 μl/3 ml。
10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。