■ 制品内容 (100 μl PCR×100次或50 μl PCR×200次)
TaKaRa Taq*1 (5 U/ μl)
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50 μl (250 U)
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dNTP Mixture*2 (各2.5 mM)
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1.28 ml
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10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
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1 ml
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100 mM Tris-HCl(pH8.9)
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500 mM KCl
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15 mM MgCl2
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10 × PCR Buffer (Mg2+ Free)
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1 ml
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100 mM Tris-HCl(pH8.9)
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500 mM KCl
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MgCl2 (25 mM)
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1 ml
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Control Template (1 μg/ml λ DNA)
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100 μl
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Control Primer 1*3 (20 pmol/μl)
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50 μl
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Control Primer 2*3 (20 pmol/μl)
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50 μl
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Control Primer 3*3 (20 pmol/μl)
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50 μl
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λ-EcoT14 I Marker*4 (100 ng/μl)
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40 μl
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6 × Loading Buffer*5
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1 ml
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*1 TaKaRa Taq™酶说明 (5 U/μl)
【酶贮存液】
20 mM Tris-HCl(pH8.0),100 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.5% Tween20,0.5% NP-40,50% Glycerol。
【活性定义】
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、pH9.3、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。
【Reaction mixture】
25 mM
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TAPS (pH9.3,25℃)
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50 mM
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KCl
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2 mM
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MgCl2
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0.1 mM
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DTT
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200 μM
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each dATP·dGTP·dCTP
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100 μM
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[3H]-dTTP
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0.25 mg/ml
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activated salmon sperm DNA
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2 dNTP Mixture (各2.5 mM)
dNTP Mixture无需稀释,可直接用于PCR。
Form:溶于水 (钠盐),pH7-9
纯度:每种dNTP≥98%
*3 Control Primer序列
Control Primer 1
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5'-GATGAGTTCGTGTCCGTACAACT-3'
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Control Primer 2
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5'-CCACATCCATACCGGGTTTCAC-3'
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Control Primer 3
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5'-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3'
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* 使用Control Primer 1、2时,可以扩增Control Template (λ DNA)的6,012 bp DNA片段。使用Control Primer 1、3时,可以扩增Control Template (λ DNA)的500 bp DNA片段。
*4 λ-EcoT14 I Marker
此marker是用限制性内切酶EcoT14 I分解λcl857 Sam7 DNA得到的。由DNA片段19,329 bp;7,743 bp;6,223 bp;4,254 bp;3,472 bp;2,690 bp;1,882 bp;1,489 bp;925 bp;421 bp;74 bp等组成。由于λ DNA分解的末端片段与COS end相连,需加热处理(60℃,5 min.)。
*5 6×Loading Buffer的组成
36%
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甘油
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30 mM
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EDTA
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0.05%
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溴酚兰
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0.035%
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二甲苯青
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■ 制品说明
PCR Amplification Kit适用于各种DNA模板的PCR扩增。本试剂盒含有λ DNA作为对照模板以及扩增λ DNA目的序列用的对照引物 (6,012 bp,500 bp) 。
■ 保存
-20℃。
■ 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前一定认真阅读。
1. 试剂盒中的各组份,要仔细混匀后使用,但TaKaRa Taq要避免剧烈操作。
2. 因为样品DNA的提取方法不同,10×PCR Buffer (Mg2+ plus)中的Mg2+浓度可能并非最适浓度,此时可使用10×PCR Buffer (Mg2+ Free)和MgCl2,调整PCR反应液的适合的Mg2+浓度。