■ 制品内容 (Code No.: RR013A : 50 次量)
TaKaRa LA Taq (5 U/ μl) 125 U
dNTP Mixture (各2.5 mM) 400 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ plus; Mg2+浓度25 mM) 250 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ free) 250 μl
MgCl2 (25 mM) 500 μl
Control Template (100 ng/μl)*1 10 μl
Control Primer LA3 (10 μM) 10 μl
Control Primer LA4 (10 μM) 10 μl
λ -Hind III digested MW Marker*2 (100 ng/μl) 20 μl
2 × GC Buffer I (Mg2+ plus; Mg2+ 浓度5 mM)*3 1.25 ml
2 × GC Buffer II (Mg2+ plus; Mg2+ 浓度5 mM)*3 1.25 ml
Control Primer GC1 (10 μM) 10 μl
Control Primer GC2 (10 μM) 10 μl
*1 Control Template
Human HL60来源的基因组DNA，浓度为100 ng/μl。
*2 λ-Hind III digest MW Marker
Marker大小范围：23,130；9,416；6,557；4,361；2,322；2,027；564；125 bp。
*3 GC Buffer的使用
当扩增GC rich或复杂的立体结构DNA片段时，请先使用GC Buffer I，当使用GC Buffer I 不能扩增时，再试用GC Buffer II。
■ 制品说明
本试剂盒应用了特别的LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术，适用于正确地扩增长链DNA片段。使用TaKaRa LA Taq并搭配专用的反应缓冲液 (10 × LA PCR Buffer II)，可得到更长更准确的扩增产物。以λ DNA为模板，扩增产物可达48 kb；以基因组DNA为模板，扩增产物可达30 kb。
本试剂盒包含所有适合LA PCR反应的必要试剂，以达到高效扩增、准确地获得长链PCR产物。LA PCR技术扩大了PCR技术的应用范围，并在推动基因组分析的方方面面体现着特殊价值。本试剂盒同样适用于短链目的产物的扩增。此外，本制品中还配备了高GC含量模板专用的Buffer (2×GC Buffer I、II)。
■ 保存
-20℃。
■ Control Primer序列
引物名称
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各引物序列
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Control Primer LA3*1
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5′-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3′
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Control Primer LA4*1
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5′-TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC-3′
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Control Primer GC1*2
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5′-GGGAGGGGACCGGGGAACAGAG-3′
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Control Primer GC2*2
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5′-GAACAGTCCGTCACTTCACGTG-3′
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*1 Control Primer LA3和Control Primer LA4可以扩增Control Template的17.5 kb 片段。
*2 Control Primer GC1和Control Primer GC2可以扩增Control Template的1,255 bp的GC rich区域。
■ 使用注意
1. 试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, TaKaRa LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
2. 配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。
3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。