■ 制品内容 (Code No.: RR023A : 100次量*1)
BcaBEST Polymerase (22 U/μl)
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50 μl
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RNase Inhibitor (40 U/μl)
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25 μl
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Random 9 mers (50 μM)
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50 μl
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Oligo dT Primer (50 μM)
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50 μl
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RNase Free dH2O
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1 ml
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Bca-Optimized Taq (5 U/μl)
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25 μl
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2 × Bca lst Buffer
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1.25 ml × 2 支
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5 × Bca 2nd Buffer
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800 μl
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dNTP Mixture (各10 mM)
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50 μl
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MgSO4 (25 mM)
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500 μl
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Control F-1 Primer*2 (20 μM)
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25 μl
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Control R-1 Primer*3 (20 μM)
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25 μl
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Positive Control RNA (2 × 105 copies/μl)
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25 μl
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*1 反转录反应10 μl,PCR反应体系50 μl,可使用100次。
*2 Positive Control RNA用上游引物。
*3 Positive Control RNA用下游引物。
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■ 制品说明
PCR(Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应)是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒含有从RNA反转录到cDNA以及扩增此cDNA所必需的全部试剂,即用Bacillus caldotenax来源的BcaBEST Polymerase从RNA合成cDNA,然后在同一试管内加入应用LA PCR技术研制的Bca-Optimized Taq扩增此cDNA。此外,使用BcaBEST Polymerase进行反转录反应的最适温度是65℃,所以对具有复杂二级结构的RNA特别适合。
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■ 各种引物的序列
引物名称
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各引物序列
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Random 9 mers
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5′-NNNNNNNNN-3′
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Oligo dT Primer
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包含Takara特别设计的dT区域。本序列与TaKaRa RNA PCR
Kit(AMV)Ver.3.0(Code No. RR019A/B)及TaKaRa RNA LA PCR
Kit(AMV)Ver.1.1(Code No. RR012A)中的Oligo dT-Adaptor
Primer的序列不同,没有M13 Primer M4区域。
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Control F-1 Primer
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5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
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Control R-1 Primer
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5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
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■ 试剂盒的原理
BcaBEST RNA PCR的原理图
■ 试剂盒特点
RNA模板
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适用于所有RNA (对富含GC的mRNA及具有复杂二级结构的mRNA特别有效)
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扩增片段大小
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5 kb以下
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反转录酶
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BcaBEST Polymerase (最适温度65℃)
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DNA聚合酶
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Bca-Optimized Taq
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RNase Inhibitor
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必须使用 (试剂盒中含有)
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合成cDNA第一条链的引物
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Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特异性下游PCR Primer 可供选择
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操 作
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在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)
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