■ 制品说明
PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，RT-PCR方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒采用了一步（One Step）RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中连续进行，反应中途不需添加任何试剂，避免污染危害。同时反应液中已含有电泳时所必需的色素试剂（蓝色和黄色色素），反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色（Emerald Green），电泳时指示效果明显，容易观察样品的电泳位置。反转录反应使用了具有很强延伸能力的反转录酶PrimeScript RTase。该反转录酶对具有复杂二级结构的RNA模板也具有很强的延伸能力；PCR反应使用了扩增性能优越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，大大提高了本试剂盒的扩增性能和反应特异性。反应试剂已优化，以实现与不含染料和loading buffer的传统RT-PCR系统具有相同反应效果。在本试剂盒中，已将PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用稳定剂等配制成了Premix型的PrimeScript 1 Step Enzyme Mix；同时把反应用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer（Dye Plus）的形式，使实验操作时的反应液配制和电泳检测更为简单方便。
本试剂盒具有以下特点：
1. 进行高效的RT-PCR扩增。
2. 反应液制备简单，可直接进行凝胶电泳。
3. 反转录温度可以设定为50℃，能够有效抑制非特异性扩增。
4. 可减少由于错配和引物二聚体造成的非特异性反应。
本试剂盒中含有进行One Step RT-PCR反应用的全部试剂，可以方便有效地对RNA进行扩增分析。
■ 各种引物的序列
引物名称 各引物序列
Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
■ Positive Control RNA
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。
图1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段
■ 原理
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2（Dye Plus）可在同一反应管中连续进行由PrimeScript RTase将RNA反转录为cDNA，再由TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA的RT-PCR反应。
图2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理图
■ 保存
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