Aureobasidin A (AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans R106中分离的一种环状缩肽抗生素,在较低浓度下(0.1–0.5 μg/ml)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger)。
AbA抑制酵母中AUR1基因(1,2)编码的肌醇磷脂酰胺(inositol phosphorylceramide ,IPC)合成酶的活性,突变基因AUR1-C的表达使转化酵母对AbA产生了抗性。Matchmaker Gold系统用这个基因作为蛋白质互作研究的报告基因。
AbA筛选大大消除了仅用营养报告基因(如HIS3)进行低严紧度初筛时产生的背景克隆。由于AbA可以直接杀死敏感的酵母菌株,而不是使菌株生长延迟,所以基于AbA的筛选有利于阳性克隆的生长和识别。一般实际操作中,用AbA进行低严紧度初筛时会获得很多克隆,之后再用Matchmaker Gold系统中的4个报告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)进行高严紧度的二次筛选以验证阳性克隆。
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