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推荐 RIPA裂解液(带PMSF)
货号:C1055  |  规格:100ml  |  品牌:Applygen
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说明
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描述:

RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,是常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解液加强型特别适于western blot大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等PMSF能抑制蛋白酶对蛋白的降解。

储存:

RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存

PMSF粉末 (100mM -20℃保存

PMSF溶剂 1ml  -20℃保存

以上组分12个月有效

制备细胞裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)

    1.800g4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV,106cells=~20ml, 107cells =~100mlPCV);

    2.50-100ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500ml,冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;

    3.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;

    4.假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)

    1.50-100mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS

    2.加入0.5-1ml预冷RIPA裂解缓冲液;

    3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;

    4.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;

    5.假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;

    6.20%的甘油保存于-70oC -20oC

注意:

    1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;

    2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;

    3.PMSF溶液易降解,请于-20oC保存,按比例现用现

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