■ 制品内容（Code No. 2460A）
|
|
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μl)
|
500 U
|
|
10× Capping Buffer
|
100 μl
|
|
S-adenosylmethionine (SAM) (32 mM)
|
100 μl
|
|
GTP (10 mM)
|
50 μl
|
|
|
|
|
■ 制品说明
|
|
在真核生物中，帽结构对于mRNA的稳定，出核转运以及翻译起到重要作用。Vaccinia Capping Enzyme是一种来源于牛痘病毒的加帽酶，在RNA的5’末端(5’-三磷酸RNA)加上7-甲基鸟苷酸结构（Cap 0）。本酶由D1和D12两个亚基组成，具有RNA三磷酸酶、鸟苷酸转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶这三种酶活性。该酶与本产品中包含的试剂一起使用（10X Capping Buffer, S-adenosylmethionine (SAM), GTP）可以在体外高效合成mRNA的完整Cap0结构。此外，这种酶也可以与mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（Code No. 2470A/B）一起使用，一步反应高效地在RNA 5’末端紧邻帽结构（Cap0）的第一个核苷酸的 2’-O 上添加甲基基团，形成带有 Cap 1 结构的 mRNA。
|
|
|
|
■ 用途
|
1. Cap0 mRNA的制备
2. 标记5’末端mRNA
|
|
|
|
■ 保存
|
|
-20℃
|
|
|
|
■ 来源
|
|
Escherichia coli carrying plasmids containing the genes for vaccinia virus capping enzyme
|
|
|
|
■ 性质
|
|
分子量：约98 kDa和33 kDa（异二聚体）
|
|
|
|
■ 活性定义
|
|
在37℃下1小时内将10 pmol的[α-32P]GTP结合到RNA转录物中所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
|
|
|
|
■ 使用注意
|
1. 混匀时，不要剧烈振荡。
2. 如果试剂、试管或微量移液器吸头被RNase污染，就会导致RNA产量减少或降解。在实验过程中应采取预防措施以避免RNase污染，如戴一次性手套以及使用专用于RNA实验的试管及微量移液器吸头。
|