20 μl 反应×50次量
|
5×gDNA Eraser Premix＊1
|
100 μl
|
|
5×PrimeScript IV cDNA Synthesis Mix Ⅱ＊2
|
200 μl
|
|
5×PrimeScript IV cDNA Synthesis Mix Ⅱ (RTase-)＊3
|
60 μl
|
|
Random 6 mers (50 μM)＊4
|
100 μl
|
|
RNase Free H2O
|
1 ml×2
|
【各引物序列】
|
引物名称
|
引物序列
|
|
Random 6 mers
|
pd(N)6
|
|
Oligo dT Primer
|
Takara特别开发的dT区域的序列＊5
|
*1：5×gDNA Eraser Premix成分是后续反转录反应所必需的，请务必进行基因组DNA的除去反应。其中含有RNase Inhibitor。
*2：含有PrimeScript IV RTase、Oligo dT Primer、dNTP Mixture及反应Buffer（含Mg2+）。
*3：5×PrimeScript IV cDNA Synthesis Mix Ⅱ（RTase-）为不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，可替代5×PrimeScript IV cDNA Synthesis Mix Ⅱ 用于检验RNA模板中是否有基因组DNA残留及基因组DNA去除情况。（可选）
*4：不含polyA的 RNA起始cDNA的合成及Real Time PCR用的cDNA的合成，RNA全部区域cDNA的均匀合成等情况下添加至反应液中。
*5：该序列与TaKaRa RNA PCR™ Kit (AMV) Ver.3.0 (Code No. RR019A/B) 中的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有M13 Primer M4的序列。
PrimeScript™ IV 1st strand cDNA Synthesis Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA, 并从total RNA或polyA+ RNA起始的1st strand cDNA的试剂盒。试剂盒中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，42℃，2 min即可除去基因组DNA，之后添加含有完全抑制DNA分解活性成分的反转录反应试剂，进行反转录反应。由于基因组去除试剂和反转录反应试剂均已预混成Premix试剂，操作简便，可以迅速地完成从基因组DNA去除到cDNA合成的反应。
本制品通过添加辅助蛋白质改良了Buffer的组成，省去了以往进行反转录反应前的RNA变性操作。此外，PrimeScript IV RTase相比于以往制品，能在更短时间内合成cDNA。通过提高耐热性使反转录反应可以在高温下进行，在使用Gene Specific Primer合成cDNA的效率和特异性的提升上发挥了重要作用。
本制品合成的1st strand cDNA适用于2nd strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增，全长cDNA文库的制备等需要高品质全长cDNA的应用。另外，通过试剂盒中附带的Random 6 mers，可以从不含有polyA＋的RNA起始合成cDNA，同时也适用于利用Real Time PCR方法进行基因表达分析的cDNA合成。